Определение резус-фактора цоликлонами: алгоритм проведения анализа и результаты

Резус-фактор представляет собой особый белок, который находится на поверхности эритроцитов. У большинства людей он присутствует, и они считаются резус-положительными, если этого белка нет, человек относится к группе резус-отрицательных. Данное исследование необходимо при проведении хирургического вмешательства (подбор донора для безопасного переливания крови), а также очень важно для беременных, чтобы вовремя выявить наличие резус-конфликта, который приводит к осложнениям.

Как определить резус-фактор при помощи цоликлонов

Для исследования используется нативная кровь человека, в которой нет консервантов, антикоагулянтов и других посторонних примесей. Также необходим такой реактив как цоликлон Анти-D Супер. В основе исследования лежит реакция прямой агглютинации. Такой метод подходит только для первичного определения резус-фактора в экстренных случаях.

В лаборатории применять нативные образцы венозной крови (допустимо использовать и биоматериал, взятый из пальца), которая хранится не более 3-х дней при температуре от 2 до 8°C.

Алгоритм проведения анализа по определению резус-фактора цоликлонами на плоскости:

1. Пластину обязательно маркируют: указывают ФИО пациента и используемый реагент.

2. На поверхность наносят каплю реагента (Анти-D Супер) объемом 0,1 мл.

3. Рядом капают микроскопическую дозу эритроцитов (приблизительно 0,03 мл).

4. При помощи стеклянной или пластиковой палочки обе капли смешиваются. Внимание! Инвентарь должен быть идеально чистым.

5. Далее необходимо подождать 10-15 секунд.

6. Затем в течение следующих 20-30 секунд планшет с образцами нужно плавно покачивать.

7. По истечении 3-х минут можно оценивать результат.

Анализ в пробирке:

1. Нужна 5% взвесь эритроцитов, предварительно отмытых в физрастворе.

2. В чистую пробирку добавляют 0,1 мл реагента и каплю эритроцитов и тщательно перемешивают.

3. Далее пробирка инкубируется в течение 30 минут. Чтобы увеличить скорость реакции, ее подогревают на водяной бане или в термостате до 37°C.

4. Пробирка с материалами помещается в центрифугу (скорость около 2000 об./мин.) на 30 секунд при комнатной температуре.

5. После пробирку слегка встряхивают, чтобы отделить осадок от дна.

6. Наличие реакции агглютинации определяется визуально. Если антиген D обнаружен, то на фоне прозрачного раствора хлорида натрия выделяются один или несколько агглютинатов, которые можно обнаружить невооруженным глазом. Если реакции не было, осадок легко разобъется и превратится в непрозрачную гомогенную взвесь.

Определение результатов

Если при смешении крови с цоликлоном Анти-D Супер произошла реакция, то у человека положительный резус-фактор. При отсутствии реакции кровь является резус-отрицательной.

В случае, когда донорская кровь оказалась резус-отрицательной, назначают дополнительные исследования: реакция конглютинации (Анти-D Супер с желатином) или используют непрямой тест Кумбса.

Назначение на определение резус-фактора дают разные специалисты: терапевты, хирурги, гинекологи, трансфузиологи и гематологи. Все исследования проводятся самым тщательным образом, чтобы исключить риск ошибки.